Гибридизация ДНК

Гибридизация ДНК, гибридизация нуклеиновых кислот — соединение in vitro комплементарных одноцепочечных нуклеиновых кислот в одну молекулу. При полной комплементарности объединение происходит легко и быстро, а в случае частичной некомплементарности слияние цепочек замедляется, что позволяет оценить степень комплементарности. Возможна гибридизация ДНК-ДНК и ДНК-РНК.

Протокол эксперимента

1. Двуцепочечную ДНК разогревают в соответствующем буфере.
2. Из-за изменения внешних условий, водородные связи между комплементарными азотистыми основаниями становятся термодинамически невыгодными и цепочки расходятся.
3. Препарат денатурированных ДНК затем смешивается с другой денатурированной ДНК.
4. Препараты далее медленно охлаждаются, при этом одноцепочечные ДНК отжигаются друг на друга (образуются водородные связи между комплементарными основаниями), при этом образуется «гибридная» молекула ДНК.

Анализ скорости отжига одноцепочечных ДНК позволяет оценивать сходства и различия в последовательностях ДНК между видами или особями одного вида.

Саузерн-блоттинг и нозерн-блоттинг

Существует два вида гибридизации нуклеиновых кислот. Оба метода используют радиоактивно-меченную одноцепочечную ДНК с известной последовательностью нуклеотидов для определения последовательности в другой одноцепочечной ДНК или РНК.

См. также

• Флюоресцентная гибридизация in situ
• Гибридизационная селекция