Натрий-фосфатный буфер

Материал из Википедии — свободной энциклопедии
Перейти к: навигация, поиск

Натрий-фосфатный буфер (англ. Phosphate buffered saline, PBS) — буферный раствор, используемый в биологических исследованиях. Представляет собой водный раствор солей, содержащий хлорид натрия, гидрофосфат натрия, хлорид калия и дигидрофосфат калия. Осмолярность и концентрации ионов в растворе обычно соответствуют концентрациям в теле человека (то есть данный буферный раствор является изотоническим).

Применение[править | править вики-текст]

Натрий-фосфатный буфер находит широкое применение, так как является изотоническим и нетоксичен для клеток. PBS используют для растворения веществ, для ополаскивания контейнеров, содержащих клетки.

Приготовление[править | править вики-текст]

Существует много способов приготовления натрий-фосфатного буфера. Некоторые формулы не содержат калия, другие содержат кальций или магний.[1]

Концентрации солей и рН
Соль Концентрация
mM
Концентрация
г/л
  NaCl   137 8,00
  KCl      2,7 0,20
  Na2HPO4    10 1,44
  KH2PO4     1,76 0,24
  pH    7,4  7,4

Для приготовления 1 литра однократного натрий-фосфатного буфера используют:[2]

  • 8,00 г NaCl
  • 0,20 г KCl
  • 1,44 г Na2HPO4
  • 0,24 г KH2PO4
  • растворяют в 800 мл дистиллированной воды
  • доводят рН до 7,4 соляной кислотой или гидроксидом натрия
  • добавляют дистиллированной воды до 1 литра.

Десять литров стокового раствора десятикратного PBS можно приготовить растворив 800 г NaCl, 20 г KCl, 144 г Na2HPO4 и 24 г KH2PO4 в восьми литрах дистиллированной воды, доведя далее объём до десяти литров. рН получившегося раствора будет примерно 6,8, но после разведения до однократного PBS станет равным 7,4. После приготовления раствора следует проверить значение рН при помощи рН-метра. При необходимости, можно скорректировать рН при помощи соляной кислоты или гидроксида натрия.

Наиболее простым способом приготовления натрий-фосфатного буфера является использование коммерчески доступных таблетированных препаратов. Такие таблетки разводят дистиллированной водой до заданного объема и получают раствор заданной концентрации.

Для клеточных культур раствор должен быть разлит на аликвоты и стерилизован автоклавированием (20 минут при 121 °C, в режиме жидкость). Стерилизация не является необходимой, в зависимости от особенностей использования. Возможно хранение натрий-фосфатного буфера при комнатной температуре, однако для предотвращения размножения бактерий длительное хранение нестерильного буфера рекомендуют осуществлять в холодильнике. Соли в концентрированных стоковых растворах при охлаждении могут выпадать в осадок, поэтому перед применением рекомендуют нагреть концентрированный раствор до комнатной температуры и дождаться полного растворения осадка.

Примечания[править | править вики-текст]

  1. Dulbecco, R. et al. (1954): Plaque formation and isolation of pure lines with poliomyelitis viruses. In: J. Exp. Med. vol. 99 (2), pp. 167—182. PMID 13130792
  2. Sambrook, Fritsch, and Maniatis (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York, volume 3, appendix B.12

См. также[править | править вики-текст]