Жёлтый флуоресцентный белок

Материал из Википедии — свободной энциклопедии
Перейти к: навигация, поиск
Жёлтый флуоресцентный белок из коралла Zoanthus.

Жёлтый флуоресцентный белок (англ. Yellow Fluorescent Protein) — генетическая мутантная форма зелёного флуоресцентного белка (GFP), выделенного из медузы эквореи Aequorea victoria. Характеризуется максимумом поглощения при 514 нм и максимумом флуоресценции при 527 нм. Широко используется в качестве флуоресцентной метки в клеточной и молекулярной биологии для изучения экспрессии клеточных белков. Кроме него разработана серия других мутантных форм GFP, таких как синий, циановый и др[1].

Применение для FRET[править | править вики-текст]

Спектр поглощения YFP довольно сильно пересекается со спектром флуоресценции CFP (англ. Cyan Fluorescent Protein), поэтому эти два флюорофора используются для создания биосенсоров, в основе работы которых лежит явление Фёрстеровского переноса энергии, или [:en:Förster resonance energy transfer|FRET]. Такие сенсоры используются для выявления определённых событий, происходящих в живых клетках. В частности, таким образом можно определять активность ферментов.

Как правило, молекула такого сенсора включает в себя 4 домена [2]:

  1. белок, являющийся носителем сенсора (это может быть практически любой белок);
  2. флюорофор CFP;
  3. домен, меняющий свою структуру в ответ на определенное воздействие (например, фосфорилирование);
  4. флюорофор YFP.

При облучении такого сенсора лазером с длиной волны, возбуждающей только CFP (например, 440 нм — почти не возбуждает YFP, но сильно возбуждает CFP), можно наблюдать флуоресценцию обоих флюорофоров. После соответствующего воздействия на домен 3 происходит изменение структуры сенсора, в результате чего флюорофор YFP отдаляется от CFP и эффективность Фёрстеровского переноса падает (в зависимости от того, на какое расстояние флюорофоры были отдалены друг от друга). В результате интенсивность флуоресценции CFP возрастает, а YFP — падает. Таким образом, по отношению флуоресценции YFP к флуоресценции CFP можно количественно оценить изменение конформации биосенсора.

Примечания[править | править вики-текст]

  1. Uemura, T.; Kim, H.; Saito, C.; Ebine, K.; Ueda, T.; Schulze-Lefert, P.; Nakano, A. (2012). «Qa-SNAREs localized to the trans-Golgi network regulate multiple transport pathways and extracellular disease resistance in plants». Proceedings of the National Academy of Sciences 109 (5): 1784–9. DOI:10.1073/pnas.1115146109. PMID 22307646.
  2. Access : Midzone activation of aurora B in anaphase produces an intracellular phosphorylation gradient : Nature

См.также[править | править вики-текст]

Библиография[править | править вики-текст]

  • Miyawaki A, Llopis J, Heim R, et al (August 1997). «Fluorescent indicators for Ca2+ based on green fluorescent proteins and calmodulin». Nature 388 (6645): 882–7. DOI:10.1038/42264. PMID 9278050.

Ссылки[править | править вики-текст]