Искусственная бактериальная хромосома

Материал из Википедии — свободной энциклопедии
Перейти к: навигация, поиск

Искусственная бактериальная хромосома (англ. bacterial artificial chromosome, BAC) — векторная система на основе F-плазмиды E. coli, участков cos фага лямбда и loxP фага Р1, используемая для клонирования длинных (150—350[1] тыс. п.н.) последовательностей ДНК[2][3][4]. F-плазмида кодирует гены, регулирующие репликацию и контролирующие копийность (1—2 молекулы на клетку). По участку loxP плазмидная ДНК может быть расщеплена белком Cre фага Р1, по cos-участку — соответствующим ферментом фага лямбда. Схожая векторная система под названием PAC (англ. p1-derived artificial chromosome) была сделана на основе бактериальной P1-плазмиды из ДНК фага P1.

Искусственные бактериальные хромосомы часто используются для секвенирования геномов организмов в различных проектах, например в проекте Геном человека. Короткий фрагмент ДНК исследуемого организма вставляется в хромосому, а затем амплифицируется и секвенируется. После этого прочитанные последовательности выравниваются in silico в результате чего получается полная последовательность генома организма. Сейчас такой подход был вытеснен более быстрыми и менее трудоёмкими методами секвенирования, например методом дробовика или методами секвенирования нового поколения.

Генетические компоненты[править | править код]

repE
регулирует репликацию и количество копий плазмиды.
parA и parB
для распределения ДНК F-плазмиды в дочерние клетки во время деления и стабильного поддержания хромосомы.
Селективный маркёр
часто ген устойчивости к антибиотикам; в некоторых также содержится lacZ в месте клонирование гена, что позволяет проводить бело-голубую селекцию.
T7 и Sp6
фаговые промоторы для транскрипции вставленных генов.

См. также[править | править код]

Примечания[править | править код]

  1. Stone NE, Fan J-B, Willour V, Pennacchio LA, Warrington JA, Hu A, Chapelle A, Lehesjoki A-E, Cox DR, Myers RM (1996). «Construction of a 750-kb bacterial clone contig and restriction map in the region of human chromosome 21 containing the progressive myoclonus epilepsy gene». Genome Research 6 (3): 218–225. DOI:10.1101/gr.6.3.218. PMID 8963899.
  2. O'Connor M, Peifer M, Bender W (1989). «Construction of large DNA segments in Escherichia coli». Science 244 (4910): 1307–1312. DOI:10.1126/science.2660262. PMID 2660262.
  3. Shizuya H, Birren B, Kim U-J, Mancino V, Slepak T, Tachiiri Y, Simon M (1992). «Cloning and stable maintenance of 300-kilobase-pair fragments of human DNA in Escherichia coli using an F-factor-based vector». Proc Natl Acad Sci USA 89 (18): 8794–8797. DOI:10.1073/pnas.89.18.8794. PMID 1528894.
  4. Shizuya, H (2001). «The development and applications of the bacterial artificial chromosome cloning system». Keio J Med. 50 (1): 26–30. DOI:10.2302/kjm.50.26. PMID 11296661.