Просмотр кода страницы Cas9

[[Файл:Cas9 5AXW.png|thumb|236px|Кристаллическая структура ''S. aureus'' Cas9 в комплексе с сгРНК и её целевой ДНК в разрешении 2.6 A˚. (Nishimasu, ''et al.'' 2015)]]
[[Файл:GRNA-Cas9-colourfriendly.png|thumb|300px|CRISPR/Cas9. Фиолетовым выделен участок [[Гидовая РНК|гидовой РНК (gRNA)]] узнающий [[Комплементарность (биология)|комплементарный]] участок-мишень на ДНК (выделен синим). [[:en:Protospacer adjacent motif|PAM]] (выделен красным).]]

'''Cas9''' ({{lang-en|'''C'''RISPR '''as'''sociated protein '''9'''}}, CRISPR-ассоциированный белок) — это управляемая при помощи [[РНК]]-гидов [[эндонуклеаза]], связанная с адаптивной иммунной системой [[CRISPR]] ({{lang-en|Clustered Regularly Interspaced Palindromic Repeats}}) у ряда бактерий, в частности ''[[Streptococcus pyogenes]]''. ''S. pyogenes'' использует Cas9 для запоминания<ref>{{cite pmid|25707807}}</ref>, последующей проверки и разрезания чужеродной ДНК<ref name=sci/>, например, ДНК [[Бактериофаги|бактериофагов]] или [[Плазмиды|плазмид]].

Cas9 выполняет проверку посредством раскручивания инородной ДНК и определения её [[Комплементарность (биология)|комплементарности]] с двадцатью спаренными основаниями [[Спейсер (биология)|спейсера]] [[Гидовая РНК|управляющей РНК]]. Если субстрат комплементарен управляющей РНК, Cas9 расщепляет чужую ДНК. В этом смысле механизм CRISPR-Cas9 имеет ряд параллелей с механизмом [[РНК-интерференция|РНК-интерференции]] (RNAi) у эукариот. Безопасность практического применения данного метода определяется в том числе и тем фактом, является ли искомая последовательность двадцати спаренных оснований уникальной в модифицируемой ДНК.

== Использование Cas9 в генной инженерии ==
[[Файл:CRISPR Sterics.pdf|thumb|350px|right|Механизм избирательного ингибирования транскрипции с помощью dCas9 путём стерического препятствия]]
[[Файл:CRISPR effectors.pdf|thumb|350px|right|Варианты Cas9, которые связываются с ДНК, но не расщепляют её могут быть использованы для создания [[Факторы транскрипции#Искусственные факторы транскрипции|искусственных факторов транскрипции]] для избирательного регулирования транскрипционной активации и репрессии]]
Кроме изначальной функции в бактериальном иммунитете, белок Cas9 активно используют для создания точечных разрывов в двойной спирали ДНК, такие разрывы могут приводить к инактивации генов или созданию гетерологичных генов посредством соединения негомологичных концов и соответствующей гомологичной рекомбинации. Вместе с белками [[ZFN]] и [[TALEN]], Cas9 становится значимым инструментом редактирования генома.<ref>Carlaw, T. M., Zhang, L. H., & Ross, C. J. (2020). CRISPR/Cas9 Editing: Sparking Discussion on Safety in Light of the Need for New Therapeutics. Human Gene Therapy, 31(15-16), 794-807. {{doi|10.1089/hum.2020.111}}</ref>

Одним из первых продемонстрировал программируемое расщепление ДНК белком Cas9 литовский биохимик [[Шикшнис, Виргиниюс|'''Виргиниюс Шикшнис''']], но его статья не была принята на рассмотрение журналом {{нп5|Cell Reports||en|}} 18 апреля 2012 года. Месяц спустя он отправил её в [[Proceedings of the National Academy of Sciences|PNAS]] где на рассмотрение и публикацию ушло несколько месяцев<ref name="Guglielmi">Guglielmi, G. (2018). [https://www.nature.com/articles/d41586-018-05308-5 Million-dollar Kavli prize recognizes scientist scooped on CRISPR] {{Wayback|url=https://www.nature.com/articles/d41586-018-05308-5 |date=20210615051839 }}. Nature, 558(7708), 17-19. {{doi|10.1038/d41586-018-05308-5}}</ref>. Тем временем американский биохимик Дженнифер Даудна и французский микробиолог Эмманюэль Шарпантье опубликовали свою статью в рецензируемый научный журнал [[Science]], где она была рассмотрена и принята в течение двух недель<ref name="Guglielmi" />.

За создание новых технологий, позволяющих проводить с помощью CRISPR-Cas9 [[редактирование генома]] [[Шарпантье, Эмманюэль|'''Эмманюэль Шарпантье''']] и [[Даудна, Дженнифер|'''Дженнифер Даудна''']] получили [[Нобелевская премия по химии|Нобелевскую премию по химии]] 2020 года.<ref>{{Cite web |url=https://www.nobelprize.org/uploads/2020/10/advanced-chemistryprize2020.pdf |title=Scientifc Background on the Nobel Prize in Chemistry 2020 A TOOL FOR GENOME EDITING |access-date=2020-10-12 |archive-date=2021-06-24 |archive-url=https://web.archive.org/web/20210624132659/https://www.nobelprize.org/uploads/2020/10/advanced-chemistryprize2020.pdf |deadlink=no }}</ref>

'''Вызывает удивление тот факт, что из-за патентных ограничений технология редактирования с помощью Cas9 доступна не ученым всего мира, а только владельцам патента, что является препятствием прогрессу науки, разработке лекарств для людей, живущих с серьёзными заболеваниями'''<ref>Wetsman N. (2022). [https://www.theverge.com/2022/3/1/22956326/crispr-patent-uc-berkeley-broad-institute-nobel  UC Berkeley loses CRISPR patent case. It’s a blow to the university and to biotech companies it partnered with] {{Wayback|url=https://www.theverge.com/2022/3/1/22956326/crispr-patent-uc-berkeley-broad-institute-nobel |date=20220302204724 }}. The  Verge.</ref>.

К 2012 году Cas9 приобрёл популярность, потому что он позволяет расщеплять практически любую нуклеотидную последовательность, комплементарную управляющей РНК<ref name=sci>{{cite doi|10.1126/science.1225829}}</ref>. Поскольку избирательность Cas9 является следствием комплементарности управляющей РНК и ДНК, а не модификации самого белка (в отличие от случаев TALEN и ZFN), для новых ДНК-мишеней возможна выработка специфических Cas9<ref>{{cite doi/10.1038.2Fnmeth.2649}}</ref>. Варианты Cas9, которые связывают ДНК, но не расщепляют её (dCas9), могут быть использованы для доставки транскрипционных [[Активатор (белки)|активаторов]] или [[Репрессор (генетика)|репрессоров]] к специфичным последовательностям ДНК с целью регулирования транскрипционной активации и репрессии<ref>{{cite doi|10.1038/nbt.2675}}</ref><ref>{{cite doi|10.1016/j.cell.2013.06.044}}</ref>. Хотя природный Cas9 требует составления управляющей РНК из двух в корне различных РНК — CRISPR-РНК (crRNA), и транс-активационную РНК (tracrRNA)<ref name=sci />, нацеливание Cas9 было упрощено при помощи выработки единой химерной управляющей РНК. Предполагается, что Cas9 можно будет использовать для изменения генома целых популяций организмов<ref>{{cite doi|10.7554/eLife.03401}}</ref>. В 2015 году посредством Cas9 впервые был модифицирован геном человеческого эмбриона<ref>{{cite doi|10.1038/nature.2015.17378}}</ref>. Разработана технология иммуногеномной инженерии [[Гибридома|гибридом]], позволяющая быстро перепрограммировать специфичность их [[Антитела|антител]] с помощью Cas9<ref>{{cite pmid|27531490}}</ref>.

Создана технология, которая позволяет редактировать отдельные «буквы» ДНК и РНК, не разрезая цепь ДНК, а путём преобразования одного нуклеотидного основания в другое<ref>{{cite pmid|27096365}}</ref>, что позволит лечить врожденные заболевания, вызванные [[Точечная мутация|точечными мутациями]].<ref>Gaudelli, N. M., Komor, A. C., Rees, H. A., Packer, M. S., Badran, A. H., Bryson, D. I., & Liu, D. R. (2017). Programmable base editing of A• T to G• C in genomic DNA without DNA cleavage. Nature, 551(7681), 464-471. {{doi|10.1038/nature24644}} {{PMC|5726555}} {{PMID|29160308}}</ref><ref>Xie, J., Huang, X., Wang, X., Gou, S., Liang, Y., Chen, F., ... & Jin, Q. (2020). ACBE, a new base editor for simultaneous C-to-T and A-to-G substitutions in mammalian systems. BMC biology, 18(1), 1-14.   {{doi|10.1186/s12915-020-00866-5}} {{PMC|7510086}} {{PMID|32967664}}</ref><ref>Liu, Z., Chen, S., Shan, H., Jia, Y., Chen, M., Song, Y., ... & Li, Z. (2020). Precise base editing with CC context-specificity using engineered human APOBEC3G-nCas9 fusions. BMC biology, 18(1), 111  {{doi|10.1186/s12915-020-00849-6}} {{PMC|7461344}} {{PMID|32867757}}</ref>

Используя  [[цитидин]]-[[Дезаминирование|деаминазы]] или же [[аденозин]]-деаминазы соединённые с dCas9 можно выключить экспрессию (путём введения преждевременных [[стоп-кодон]]ов<ref>Billon, P., Bryant, E. E., Joseph, S. A., Nambiar, T. S., Hayward, S. B., Rothstein, R., & Ciccia, A. (2017). CRISPR-mediated base editing enables efficient disruption of eukaryotic genes through induction of STOP codons. Molecular cell, 67(6), 1068-1079.    {{doi|10.1016/j.molcel.2017.08.008}}   {{PMC|5610906}}   {{PMID|28890334}}</ref>) или поменять [[сплайсинг]] необходимые для синтеза тех или иных белков<ref>Kluesner, M. G., Lahr, W. S., Lonetree, C. L., Smeester, B. A., Claudio-Vázquez, P. N., Pitzen, S. P., ... & Webber, B. R. (2020). CRISPR-Cas9 cytidine and adenosine base editing of splice-sites mediates highly-efficient disruption of proteins in primary cells. bioRxiv. {{doi|10.1101/2020.04.16.045336}}</ref><ref>Levy, J. M., Yeh, W. H., Pendse, N., Davis, J. R., Hennessey, E., Butcher, R., ... & Liu, D. R. (2020). Cytosine and adenine base editing of the brain, liver, retina, heart and skeletal muscle of mice via adeno-associated viruses. Nature Biomedical Engineering, 4(1), 97-110. {{doi|10.1038/s41551-019-0501-5}}   {{PMC|6980783}}   {{PMID|31937940}}</ref>

Создана технология MAGESTIC (multiplexed accurate genome editing with short, trackable, integrated cellular barcodes), которая не только расщепляет ДНК, но ещё и доставляет к месту разрыва кусок ДНК необходимый для точной замены (с помощью гибридного связывающего ДНК белка [[:en:Repressor lexA|LexA]]-Fkh1p), что повышает точность и эффективность редактирования<ref>{{cite pmid|29734294}}</ref><ref>{{Cite web |url=https://www.sciencedaily.com/releases/2018/05/180508102209.htm |title=Taking CRISPR from clipping scissors to word processor. New platform transforms gene editor into precision tool |access-date=2018-05-09 |archive-date=2019-04-10 |archive-url=https://web.archive.org/web/20190410183757/https://www.sciencedaily.com/releases/2018/05/180508102209.htm |deadlink=no }}</ref>. Ещё одним инструментом для целевой вставки ДНК может стать CRISPR-ассоциированная [[транспозаза]] CAST (CRISPR-associated transposase) [[цианобактерии]] Scytonema hofmanni. ShCAST катализирует РНК-управляемую транспозицию ДНК путем однонаправленной вставки ниже протоспейсера сегментов ДНК размером в 60-66 пар нуклеотидов <ref>Strecker J., Ladha A., Gardner Z., et al., (2019). RNA-guided DNA insertion with CRISPR-associated transposases. Science, eaax9181  {{DOI|10.1126/science.aax9181}}</ref>.

== Использование dCas9 ==
Соединив инактивированную молекулу dCas9, которая связывает ДНК, но не расщепляет её, с нуклеазой [[:en:FokI|FokI]], удаётся получить нуклеазы и рестриктазы для высокоселективного разрезания ДНК<ref>{{cite pmid|24770325}}</ref><ref>{{cite pmid|24770324}}</ref><ref>{{cite pmid|26068112}}</ref>. Разработан также способ избирательного [[эпигенетика|эпигенетического]] перепрограммирования активности генов с помощью инактивированной молекулы dCas9, соединённой с ферментом, осуществляющим де[[метилирование ДНК]]<ref>{{cite pmid|27462456}}</ref>. Причём такое перепрограммирование эпигенома можно проводить даже ''in vivo''<ref>{{cite pmid|27571369}}</ref><ref>Xu, X.; Hulshoff, M.S.; Tan, X.; Zeisberg, M.; Zeisberg, E.M. CRISPR/Cas Derivatives as Novel Gene Modulating Tools: Possibilities and In Vivo Applications. Int. J. Mol. Sci. 2020, 21(9), 3038; https://doi.org/10.3390/ijms21093038</ref>. Позднее выяснилось, что если укоротить управляющую РНК до 14-15 нуклеотидов, то молекула Cas9 теряет способность разрезать ДНК<ref>{{cite pmid|26436575}}</ref><ref>{{cite pmid|26344044}}</ref>. Используя это свойство удалось создать систему для избирательной активации определённых генов ''in vivo'' и проверить её эффективность путём лечения мышей со смоделированными заболеваниями<ref name="Belmonte">{{cite pmid|29224783}}</ref>. У этого метода есть только одна проблема: обычно система CRISPR загружается в безвредный вирус, называемый [[Аденоассоциированный вирус|аденоассоциированным вирусом (AAV)]], который переносит систему в клетку. Но весь белок, состоящий из dCas9 и направляющей РНК, слишком велик, чтобы поместиться в один AAV. Чтобы обойти эту проблему, исследователи загрузили dCas9 в один вирус, а управляющую РНК — в другой<ref name="Belmonte" />. Созданы трансгенные линии мышей для направленной регуляции генов ''in vivo'' путем редактирования эпигенома  с помощью систем dCas9p300 и dCas9KRAB. Эти линии мышей являются удобными инструментами для манипулирования экспрессией генов in vivo с помощью различных направляющих РНК.<ref>Gemberling, M., Siklenka, K., Rodriguez, E., Eisinger, K., Barrera, A., Liu, F., ... & Gersbach, C. (2021). Transgenic mice for in vivo epigenome editing with CRISPR-based systems. bioRxiv. https://doi.org/10.1101/2021.03.08.434430</ref>

[[File:DCas9 Suntag Activator (2).jpg|thumb|Использование системы Suntag позволяет нескольким антителам, слитым с активатором транскрипции VP64, связываться с dCas9-Suntag. Это, в свою очередь, задействует РНК-полимеразу и увеличивает экспрессию генов. смотри также рис 1 в ссылке<ref name="SunTag" />]]
Повысить эффективность молекулы dCas9 позволяет повторяющийся полипептидный массив из повторяющихся [[антиген]]ов, называемый SunTag, который может привлекать несколько копий [[Антитела|антител]], связанных с ферментом, осуществляющим эпигенетическое редактирование, или же с носителем [[Флуоресценция в биологических исследованиях#Флуоресцентные зонды и метки|флуоресцентной метки]].<ref name="SunTag">Morita, S., Horii, T., Kimura, M., & Hatada, I. (2020). Synergistic Upregulation of Target Genes by TET1 and VP64 in the dCas9–SunTag Platform. International journal of molecular sciences, 21(5), 1574. {{doi|10.3390/ijms21051574}} {{PMC|7084704}} {{PMID|32106616}}</ref><ref>Tanenbaum, M. E., Gilbert, L. A., Qi, L. S., Weissman, J. S., & Vale, R. D. (2014). A protein-tagging system for signal amplification in gene expression and fluorescence imaging. Cell, 159(3), 635-646. {{doi|10.1016/j.cell.2014.09.039}} {{PMC|4252608}} {{PMID|25307933}}</ref>

Ещё одно применение dCas9 это программируемая [[Эпигенетика#Модификации гистонов|модификация аминокислот в белках]] [[хроматин]]а. Например искусственная [[Гистоны|гистон]]-[[протеинкиназы|протеинкиназа]] dCas9-dMSK1 позволяет осуществить гипер[[фосфорилирование]]  [[серин]]а 28 в [[:en:Histone H3|гистоне H3]] (H3S28ph), играющего  роль "пусковой кнопки" в избирательной активации [[промотор]]ов, и таким образом,  повысить [[Экспрессия генов|экспрессию выбранных генов]].<ref>Li, J., Mahata, B., Escobar, M. et al. (2021). Programmable human histone phosphorylation and gene activation using a CRISPR/Cas9-based chromatin kinase. Nat Commun 12, 896,  https://doi.org/10.1038/s41467-021-21188-2</ref><ref>[https://www.sciencedaily.com/releases/2021/02/210209151853.htm  New CRISPR tech targets human genome's complex code. Programmable CRISPR/Cas9-based kinase offers insights into, control over regulatory histone proteins] {{Wayback|url=https://www.sciencedaily.com/releases/2021/02/210209151853.htm |date=20210212112705 }}. ScienceDaily, 9 February 2021</ref>

== Новые способы доставки Cas9 в клетку ==
Основными требованиями к системе доставки Cas9 помимо высокой эффективности доставки является:
(1) конструкция синтезирующая Cas9 не должна встраиваться в геном клетки и не должна быть в клетке постоянно чтобы не мешать работе клетки и не спровоцировать иммунных реакций;
(2) средство доставки должно быть способно вместить достаточно большие по размерам фермент Cas9 или кодирующую его мРНК, а также одну или несколько направляющих РНК;
(3) оно должно быть удобно для использования в виде инъекций;
(4) такое средство вместе с Cas9 и направляющими РНК должно быть достаточно легко воспроизводимым для крупномасштабного производства лекарственного препарата для борьбы с распространенными болезнями.
Таким критериям в отличие от вирусных систем доставки, отвечают липидные наночастицы.<ref>Wang, M., Zuris, J. A., Meng, F., Rees, H., Sun, S., Deng, P., ... & Xu, Q. (2016). Efficient delivery of genome-editing proteins using bioreducible lipid nanoparticles. Proceedings of the National Academy of Sciences, 113(11), 2868-2873.</ref><ref>Qiu, M., Glass, Z., Chen, J., Haas, M., Jin, X., Zhao, X., ... & Xu, Q. (2021). Lipid nanoparticle-mediated codelivery of Cas9 mRNA and single-guide RNA achieves liver-specific in vivo genome editing of Angptl3. Proceedings of the National Academy of Sciences, 118(10).  {{PMID|33649229}} {{doi|10.1073/pnas.2020401118}}</ref> Так, например, была создана биодеградируемая система доставки Cas9 липидной наночастицей, которая позволила после однократного введения достичь ''in vivo'' более 97 % ингибирования уровня одного из белков сыворотки крови. При этом такое однократное введение, несмотря на временный характер системы доставки и компонентов системы редактирования, приводило к долговременному ингибированию продолжавшемуся в течение 12 месяцев<ref>{{cite pmid|29490262}}</ref>. Для доставки используют также [[внеклеточные везикулы]]<ref>Horodecka, K., & Düchler, M. (2021). CRISPR/Cas9: Principle, Applications, and Delivery through Extracellular Vesicles. International Journal of Molecular Sciences, 22(11), 6072. {{PMID|34199901}} {{PMC|8200053}} {{DOI|10.3390/ijms22116072}}</ref>

Тем не менее продолжается разработка вирусных частиц для доставки Cas9 и [[:en:Guide RNA|sgРНК]]. Одной из таких разработок является NanoMEDIC (nanomembrane-derived extracellular vesicles for the delivery of macromolecular cargo)<ref>Gee, P., Lung, M. S., Okuzaki, Y., Sasakawa, N., Iguchi, T., Makita, Y., ... & Wang, X. H. (2020). Extracellular nanovesicles for packaging of CRISPR-Cas9 protein and sgRNA to induce therapeutic exon skipping. Nature Communications, 11(1), 1-18. {{PMC|7070030}}  {{PMID|32170079}} {{doi|10.1038/s41467-020-14957-y}}</ref> NanoMEDIC эффективно индуцировал редактирование генома в различных типах клеток человека, таких как Т-клетки, моноциты, ИПСК, корковые нейроны, полученные из ИПСК, и миогенные клетки.

Поскольку существующие методы введения систем CRISPR-Cas в клетки с использованием вирусов-носителей и электрических импульсов, недостаточно эффективны для клеток, взятых непосредственно у пациентов (так называемых первичных клеток), предложено использовать комбинацию двух модифицированных пептидов, (одного из вируса ВИЧ и одного из вируса гриппа) [[:en:Cell-penetrating peptide|облегчающую проникновение молекул]] CRISPR-Cas9 и Cas12a через внешнюю мембрану первичных клеток и в ядра, где находится большая часть клеточной ДНК. Это позволило сократить время инкубации и повысило эффективность редактирования генов до 98%<ref>Zhang, Z., Baxter, A. E., Ren, D., Qin, K., Chen, Z., Collins, S. M., ... & Shi, J. (2023). Efficient engineering of human and mouse primary cells using peptide-assisted genome editing. Nature Biotechnology, 1-11. {{PMID|37095348}} {{DOI|10.1038/s41587-023-01756-1}}</ref>. Метод назван '''PAGE''' (Peptide-Assisted Genome Editing).

Легче переносить в клетки для редактирования генома более компактные белки Cas, поскольку они могут быть упакованы в небольшие по объёму средства доставки, такие как дезактивированный [[аденоассоциированный вирус]] (AAV).  В качестве таких компактных белков можно использовать варианты Cas, обнаруженные в [[бактериофаг]]ах, например CRISPR-CasΦ, который вдвое меньше по молекулярной массе по сравнению с Cas9<ref>Pausch P., Al-Shayeb1 B., Bisom-Rapp E,  et al. (2020). CRISPR-CasΦ from huge phages is a hypercompact genome editor. Science. 369(6501), 333-337  {{DOI|10.1126/science.abb1400}}</ref>  или генноинженерный CasMINI, который несмотря на малые размеры, на клетках млекопитающих оказался столь же эффективен как и обычный 
Cas, и при этом лучше проникает в клетки<ref>Xiaoshu Xu, Augustine Chemparathy, Leiping Zeng, Hannah R. Kempton, Stephen Shang, Muneaki Nakamura, Lei S. Qi, (2021). Engineered miniature CRISPR-Cas system for mammalian genome regulation and editing, Molecular Cell, https://doi.org/10.1016/j.molcel.2021.08.008.</ref>

== Модификация Cas9 ==
Модификация Cas9 путем её слияния с хроматин-модулирующими пептидами, полученными из белков группы высокой подвижности [[:en:HMGN1|HMGN1]] и [[HMGB1]], [[Гистоны|гистона]] [[:en:Histone H1|H1]] и [[:en:Chromatin structure remodeling (RSC) complex|комплексов ремоделирования]] [[хроматин]]а, повышает её активность в несколько раз, особенно в отношении рефрактерных для неё участков хроматина. Эта стратегия слияния, называемая CRISPR-хром (англ. CRISPR-chrom), может быть использована для улучшения эффективности работы [[Нуклеаза|нуклеаз]] Cas9 при модификации генома<ref>{{cite pmid|31021236}}</ref>.
[[Файл:Редактирование с праймером.png|thumb|Комплекс pegРНК с гибридным белком nCas9 (H840A) – обратная транскриптаза (RT), редактирующая с [[праймер]]ом]]
[[Файл:Механика праймер опосредованного редактирования с Cas9.png|thumb|Механика праймер опосредованного редактирования с Cas9 по Anzalone et al. (2019)<ref name="Anzalone" /> в модификации Geurts et al. (2021)<ref name="Geurts" />]]

=== CRISPR/Cas9 редактирование с праймером ===
'''[[:en:Prime editing|dCas9-RT редактирование с праймером]]''' — в этом методе используется нуклеаза Cas9 (модифицированная в никазу, так что она может создавать разрыв только в одной цепи ДНК) соединённая с обратной транскриптазой (RT) и вместо обычной направляющей РНК используется так называемая pegРНК (prime editing guid RNA — с [[праймер]]ом редактирующая гид РНК). Этот метод, по мнению авторов, является более точным и универсальным, чем все разработанные до сих пор альтернативы CRISPR <ref name="Anzalone">Anzalone, A. V., Randolph, P. B., Davis, J. R., Sousa, A. A., Koblan, L. W., Levy, J. M., ... & Liu, D. R. (2019). Search-and-replace genome editing without double-strand breaks or donor DNA. Nature, 1-1.   {{DOI|10.1038/s41586-019-1711-4}}</ref><ref name="Geurts">Geurts, M. H., de Poel, E., Pleguezuelos-Manzano, C., Oka, R., Carrillo, L., Andersson-Rolf, A., ... & Clevers, H. (2021). Evaluating CRISPR-based prime editing for cancer modeling and CFTR repair in organoids. Life Science Alliance, 4(10). {{PMID|34373320}} {{DOI|10.26508/lsa.202000940}}</ref><ref>Ledford, H. (2019). Super-precise new CRISPR tool could tackle a plethora of genetic diseases. Nature, 574(7779), 464-465 {{doi|10.1038/d41586-019-03164-5}}</ref><ref>[https://www.the-scientist.com/news-opinion/new-prime-editing-method-makes-only-single-stranded-dna-cuts-66608  New “Prime Editing” Method Makes Only Single-Stranded DNA Cuts] {{Wayback|url=https://www.the-scientist.com/news-opinion/new-prime-editing-method-makes-only-single-stranded-dna-cuts-66608 |date=20191023144022 }}. The Scientist</ref>.

=== Модульная платформа SSSavi на основе dCas9 для комбинаторного редактирования эпигенома ===
Cистема SSSavi представляет собой сменную и реконфигурируемую стыковочную платформу, объединённую с dCas9, что позволяет одновременно задействовать до четырёх различных эффекторов, обеспечивая точный контроль состава эффекторов и их пространственного порядка. Пространственное предетерминированное упорядочение используемых эффекторов позволит более точно осуществлять регуляцию транскрипции.<ref>Swain, T., Pflueger, C., Freytag, S., Poppe, D., Pflueger, J., Nguyen, T., ... & Lister, R. (2024). A modular dCas9-based recruitment platform for combinatorial epigenome editing. Nucleic Acids Research, 52(1), 474–491 {{doi|10.1093/nar/gkad1108}}</ref>

== Использование dCas9 для визуализации геномных последовательностей in situ ==
Исследователи разработали новый метод молекулярной визуализации с помощью  РНК-направляемой эндонуклеазы  CRISPR/dCas9 связанной с меткой. Технология позволила  метить выбранные  геномные последовательности в ядрах и хромосомах in situ. Метод назван RGEN-ISL. В отличие от классической [[Флуоресцентная гибридизация in situ|флуоресцентной гибридизации in situ]], RGEN-ISL не требует денатурации ДНК и, следовательно, обеспечивает лучшую сохранность структуры хроматина<ref>{{cite pmid|30847946}}</ref>.
Аналогичную функцию выполняет генетический инструмент, названный CRISPR-HOT (CRISPR–Cas9-mediated homology-independent organoid transgenesis), для цветной маркировки определённых генов в [[Выращивание органов|органоидах]] человека<ref>Artegiani, B., Hendriks, D., Beumer, J. et al. (2020). [https://doi.org/10.1038/s41556-020-0472-5 Fast and efficient generation of knock-in human organoids using homology-independent CRISPR–Cas9 precision genome editing]. Nat Cell Biol</ref><ref>Yang, Q., Oost, K.C. & Liberali, P. (2020). [https://doi.org/10.1038/s41556-020-0478-z Engineering human knock-in organoids]. Nat Cell Biol</ref><ref>{{Cite web |url=https://www.hubrecht.eu/crispr-hot-a-new-tool-to-color-specific-genes-and-cells |title=CRISPR-HOT: a new tool to “color” specific genes and cells |access-date=2020-03-03 |archive-date=2020-03-03 |archive-url=https://web.archive.org/web/20200303151543/https://www.hubrecht.eu/crispr-hot-a-new-tool-to-color-specific-genes-and-cells/ |deadlink=no }}</ref>.

== CARTRIDGE ==
CARTRIDGE (Cas-Responsive Translational Regulation Integratable into Diverse Gene control) технология использует белки Cas в качестве [[репрессор]]ов и [[Активатор (белки)|активаторов]] [[Трансляция (биология)|'''трансляции''']] в клетках млекопитающих.<ref>Kawasaki, S., Ono, H., Hirosawa, M. et al. (2023). Programmable mammalian translational modulators by CRISPR-associated proteins. Nat Commun 14, 2243  https://doi.org/10.1038/s41467-023-37540-7</ref>

== Эндонуклеазы, аналогичные Cas9 ==
=== Cas12a ===
В отличие от Cas9 которая разрезает обе нити молекулы ДНК в одном и том же месте, оставляя тупые концы, [[:en:Cas12a|Cas12a]] оставляет одну нить длиннее другой, создавая [[Система рестрикции-модификации#Эндонуклеазная|липкие концы длиной 4-5 нуклеотидов]], что повышает эффективность генетических вставок и их специфичность.

=== Fanzor ===
Fanzor это программируемая РНК-управляемая эндонуклеаза [[Эукариоты|эукариот]] — организмов, включающих грибы, растения и животных.
В отличие от белков CRISPR, ферменты эндонуклеазы Fanzor кодируются в эукариотическом [[геном]]е в составе [[Мобильные генетические элементы|мобильных элементов]].<ref>{{Статья|ссылка=https://www.nature.com/articles/s41586-023-06356-2|автор=Makoto Saito, Peiyu Xu, Guilhem Faure, Samantha Maguire, Soumya Kannan, Han Altae-Tran, Sam Vo, AnAn Desimone, Rhiannon K. Macrae, Feng Zhang|заглавие=Fanzor is a eukaryotic programmable RNA-guided endonuclease|год=2023-06-28|язык=en|издание=Nature|страницы=1–3|issn=1476-4687|doi=10.1038/s41586-023-06356-2|archivedate=2023-06-29|archiveurl=https://web.archive.org/web/20230629114206/https://www.nature.com/articles/s41586-023-06356-2}}</ref><ref>{{Cite web|lang=ru|url=https://naked-science.ru/article/biology/novaya-sistema-redaktirovaniya-dnk|title=Генетики обнаружили совершенно новую систему редактирования ДНК, способную изменять геном человека|first=Даниил|last=Сухинов|website=Naked Science|date=2023-06-29|access-date=2023-07-10|archive-date=2023-06-29|archive-url=https://web.archive.org/web/20230629113602/https://naked-science.ru/article/biology/novaya-sistema-redaktirovaniya-dnk|url-status=live}}</ref>.

== См. также ==
* [[CRISPR]]
* [[Эндонуклеазы рестрикции#Искусственные рестриктазы|Искусственные рестриктазы]]
* [[Домен белка]]
* [[Факторы транскрипции#Искусственные факторы транскрипции|Искусственные факторы транскрипции]]
* [[Генетическая инженерия]]
* [[Индуцированные стволовые клетки#Трансдифференцировка с помощью CRISPR-опосредованного активатора|Трансдифференцировка с помощью CRISPR-опосредованного активатора]]
* [[:en:Epigenome editing|Epigenome editing]]
* [[:en:CRISPR/Cas Tools|CRISPR/Cas Tools]]
* [[:en:dCas9 activation system|dCas9 activation system]]
* [[:en:CRISPR interference|CRISPR interference]]
* [[:en:CRISPR-Display|CRISPR-Display]]

== Ссылки ==
{{примечания}}

== Литература ==
# Джагаров Д. Э. (2014). [https://web.archive.org/web/20150510000508/http://www.hij.ru/read/issues/2014/july/4984/  Умные ножницы для ДНК]. «Химия и жизнь -XXI век» № 7
# Джагаров Д. Э. (2014). [https://www.academia.edu/9638231/A_new_method_of_genetic_engineering_-_CRISPR_Cas9._text_in_Russian_  Новый метод генной инженерии — CRISPR/Cas9]. Academia.edu
# Дарья Спасская (2018). [https://nplus1.ru/news/2018/01/19/CRISPR-stem  CRISPR-активация одного гена превратила «взрослые» клетки обратно в стволовые]. N+1
# Монография (2020). [https://conf.icgbio.ru/crispr2020/wp-content/uploads/sites/2/2020/03/Содержание-монографии.pdf  “Методы редактирования генов и геномов”]. под ред. С.М. Закияна, С.П. Медведева, Е.В. Дементьевой, В.В. Власова.  <small>Монография состоит из 26 глав, в которых авторы детально описывают протоколы применения CRISPR‐опосредованных систем для модификации геномов различных организмов: от дрожжей до культивируемых клеток человека.</small>
# Гоглева А. А., Артамонова И. И. (2014). CRISPR-системы: структура и гипотетические функции. Природа 6 (2014), 16-21;
# Гоглева А. А., Артамонова И. И. (2014). CRISPR-системы: механизм действия и применения. Природа 7 (2014), 3-9.
# Артамонова И.(2014). [https://web.archive.org/web/20150502204822/http://biomolecula.ru/content/1498 CRISPR-системы: иммунизация прокариот] «биомолекула.ру»
# Руководство по пониманию и использованию CRISPR (на англ) <small>Загрузите бесплатную электронную книгу здесь http://powered.synthego.com/crispr-101 или здесь https://www.synthego.com/resources/gene-knockout-ebook?</small>
# [https://link.springer.com/book/10.1007/978-1-0716-1657-4 CRISPR-Cas Methods, Volume 2]. Editors: M. Tofazzal IslamKutubuddin Ali Molla, Copyright: 2021 [https://doi.org/10.1007/978-1-0716-1657-4 Springer Protocols Handbooks]  ISBN 978-1-0716-1657-4
# Asmamaw, M., & Zawdie, B. (2021). Mechanism and Applications of CRISPR/Cas-9-Mediated Genome Editing. Biologics: Targets & Therapy, 15, 353. {{PMID|34456559}} {{PMC|8388126}} {{DOI|10.2147/BTT.S326422}}
# Boti, M. A., Athanasopoulou, K., Adamopoulos, P. G., Sideris, D. C., & Scorilas, A. (2023). Recent Advances in Genome-Engineering Strategies. Genes, 14(1), 129; https://doi.org/10.3390/genes14010129
# Nuñez, J. K., Chen, J., Pommier, G. C., Cogan, J. Z., Replogle, J. M., Adriaens, C., ... & Weissman, J. S. (2021). Genome-wide programmable transcriptional memory by CRISPR-based epigenome editing. Cell, 184(9), 2503-2519. {{PMID|33838111}} {{PMC|8376083}} {{DOI|10.1016/j.cell.2021.03.025}}
# How To Conduct Successful CRISPR Experiments eBook <small>Загрузите бесплатную электронную книгу здесь http://powered.synthego.com/how-to-conduct-successful-crispr-experiments-ebook </small>
# Bravo, J.P.K., Liu, MS., Hibshman, G.N. et al. (2022). '''Structural basis for mismatch surveillance by CRISPR–Cas9'''. Nature. {{doi|10.1038/s41586-022-04470-1}} <small>Новая версия фермента названная SuperFi-Cas9 в 4000 раз реже вносит ошибочные (не целевые) разрезы, но при этом работает так же быстро, как природный Cas9.</small>
# Watters, K. E., Kirkpatrick, J., Palmer, M. J., & Koblentz, G. D. (2021). [https://www.tandfonline.com/doi/full/10.1080/20477724.2021.1880202 The CRISPR revolution and its potential impact on global health security]. Pathogens and Global Health, 1-13. {{PMID|33590814}} {{DOI|10.1080/20477724.2021.1880202}}
# {{статья |заглавие=Blossom of CRISPR technologies and applications in disease treatment |издание=Synth Syst Biotechnol |страницы=217—228 |том=3 |номер=4 |pmid=30370342 |doi=10.1016/j.synbio.2018.10.003 |язык=en |тип=journal |автор=Liu, H., Wang, L., & Luo, Y. |год=2018}}
# {{статья |заглавие=Strategies for the CRISPR-Based Therapeutics |издание=Trends in Pharmacological Sciences |страницы=55-65 |том=41 |номер=1 |doi=10.1016/j.tips.2019.11.006 |язык=en |тип=journal |автор=Li, B., Niu, Y., Ji, W., & Dong, Y. |год=2020}}
# {{статья |заглавие=ssODN-mediated knock-in with CRISPR-Cas for large genomic regions in zygotes |издание=[[Nature Communications]] |страницы=10431 |том=7 |pmid=26786405 |doi=10.1038/NCOMMS10431 |язык=en |тип=journal |автор=Kazuto Yoshimi, Yayoi Kunihiro, Takehito Kaneko, Hitoshi Nagahora, Birger Voigt, Tomoji Mashimo. |год=2016 |издательство=[[Nature Publishing Group]] }}
# [http://www.nature.com/news/crispr-gene-editing-is-just-the-beginning-1.19510  CRISPR: gene editing is just the beginning]. The real power of the biological tool lies in exploring how genomes work. Nature 531, 156—159 (10 March 2016) {{doi|10.1038/531156a}}<small>(на англ.) Обзор разных способов применения Cas9. Хорошие иллюстрации.</small>
# [http://www.cshlpress.com/default.tpl?cart=14520192576517890&action=full&--eqskudatarq=1073 CRISPR-Cas: A Laboratory Manual] Edited by Jennifer Doudna, University of California, Berkeley; Prashant Mali, University of California, San Diego
# {{статья |заглавие=Rationally engineered Cas9 nucleases with improved specificity |издание=Science |страницы=84—88 |том=351 |номер=6268 |doi=10.1126/science.aad5227 |язык=en |тип=journal |автор=Slaymaker, I. M., Gao, L., Zetsche, B., Scott, D. A., Yan, W. X., & Zhang, F. |год=2016}}
# {{статья |заглавие=High-fidelity CRISPR–Cas9 nucleases with no detectable genome-wide off-target effects |издание=Nature |doi=10.1038/nature16526 |язык=en |тип=journal |автор=Kleinstiver B. P.,   Pattanayak V.,   Prew M. S., & J. Keith Joung et al. |год=2016}}
# {{статья |заглавие=CRISPR Interference Efficiently Induces Specific and Reversible Gene Silencing in Human iPSCs |издание={{Нп3|Cell Stem Cell}} |doi=10.1016/j.stem.2016.01.022 |язык=en |тип=journal |автор=Mandegar M. A., Huebsch N., Frolov E. B., & Conklin B. R. et al. |год=2016}}
# {{статья |заглавие=Small molecule–triggered Cas9 protein with improved genome-editing specificity |издание=[[Nature Chemical Biology|Nature chemical biology]] |страницы=316—318 |том=11 |номер=5 |doi=10.1038/nchembio.1793 |язык=en |тип=journal |автор=Davis, K. M., Pattanayak, V., Thompson, D. B., Zuris, J. A., & Liu, D. R. |год=2015}}
# {{статья |заглавие=A split-Cas9 architecture for inducible genome editing and transcription modulation |издание=Nature biotechnology |страницы=139—142 |том=33 |номер=2 |doi=10.1038/nbt.3149 |язык=en |тип=journal |автор=Zetsche, B., Volz, S. E., & Zhang, F. |год=2015}}
# {{статья |заглавие=Genome engineering: Structure-guided improvement of Cas9 specificity |издание=[[Nature Reviews Molecular Cell Biology]] |страницы=3—3 |язык=en |тип=journal |автор=Zlotorynski, E. |год=2016}}
# Chu, V. T., Weber, T., Wefers, B., Wurst, W., Sander, S., Rajewsky, K., & Kühn, R. (2015). [http://www.nature.com/nbt/journal/vaop/ncurrent/full/nbt.3198.html  Increasing the efficiency of homology-directed repair for CRISPR-Cas9-induced precise gene editing in mammalian cells]. Nature biotechnology. {{doi|10.1038/nbt.3198}}
# van Erp PB et al.(2015). [http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1879625715000425 The history and market impact of CRISPR RNA-guided nucleases]. Curr Opin Virol.;12:85-90. {{PMID|25914022}}
# Cong, L., & Zhang, F. (2015). [https://link.springer.com/protocol/10.1007/978-1-4939-1862-1_10  Genome Engineering Using CRISPR-Cas9 System.] In Chromosomal Mutagenesis. Methods in Molecular Biology Vol. 1239, 2015, pp 197–217. Springer New York.
# Belhaj, K., Chaparro-Garcia, A., Kamoun, S., Patron, N. J., & Nekrasov, V. (2015). [http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0958166914001943  Editing plant genomes with CRISPR/Cas9]. Current opinion in biotechnology, 32, 76-84. {{doi|10.1016/j.copbio.2014.11.007}}
# Kennedy E.M., Cullen B.R. (2015). [http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0042682215000707  Bacterial CRISPR/Cas DNA endonucleases: A revolutionary technology that could dramatically impact viral research and treatment.] Virology, 479—480, 213—220 {{doi|10.1016/j.virol.2015.02.024}}
# Junwei Shi, Eric Wang, Joseph P Milazzo, Zihua Wang, Justin B Kinney, Christopher R Vakoc.(2015). [http://www.nature.com/nbt/journal/vaop/ncurrent/full/nbt.3235.html Discovery of cancer drug targets by CRISPR-Cas9 screening of protein domains]. Nature Biotechnology,; {{DOI|10.1038/nbt.3235}}
# Michael Boettcher, Michael T. McManus (2015). [http://www.cell.com/molecular-cell/abstract/S1097-2765(15)00310-X  Choosing the Right Tool for the Job: RNAi, TALEN, or CRISPR]. Molecular Cell, 58(4), p575-585 DOI https://dx.doi.org/10.1016/j.molcel.2015.04.028
# {{статья |заглавие=A powerful gene-editing technology is the biggest game changer to hit biology since PCR. But with its huge potential come pressing concerns. |издание=NATURE |doi=10.1038/522020a |том=522 |страницы=20—24 |язык=en |тип=journal |автор=Heidi Ledford |год=2015}}
# [https://crispr.med.harvard.edu/sgRNAScorer/  CasFinder: Flexible algorithm for identifying specific Cas9 targets in genomes] см. также: Chari R, Mali P, Moosburner M, Church GM (2015). Unraveling CRISPR-Cas9 genome engineering parameters via a library-on-library approach. Nature Methods (in press).
# {{статья |заглавие=One-step generation of conditional and reversible gene knockouts. |издание=[[Nature Methods]] |doi=10.1038/nmeth.4156 |язык=en |тип=journal |автор=Amanda Andersson-Rolf, & Bon-Kyoung Koo et al. |год=2017}}<small>CRISPR-FLIP, a strategy that provides an efficient, rapid and scalable method for biallelic conditional gene knockouts in diploid or aneuploid cells.</small>
# SØREN HOUGH (2017). [https://web.archive.org/web/20170202235336/https://www.deskgen.com/landing/resources/crispr-delivery-plasmid-dna-rna-rnp  COMPARING DNA, RNA AND RNP-BASED CRISPR DELIVERY]. [https://www.deskgen.com/landing/ DESKGEN]
# Nakajima, K., Zhou, Y., Tomita, A., Hirade, Y., Gurumurthy, C. B., & Nakada, S. (2018). [http://genome.cshlp.org/content/28/2/223.short  Precise and efficient nucleotide substitution near genomic nick via noncanonical homology-directed repair]. Genome research, 28(2), 223—230. {{PMC|5793786 }} {{DOI|10.1101/gr.226027.117}}
# Qiu, X. Y., Zhu, L. Y., Zhu, C. S., Ma, J. X., Hou, T., Wu, X. M., … & Zhu, L. (2018). [https://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/acssynbio.7b00446  Highly Effective and Low-Cost MicroRNA Detection with CRISPR-Cas9]. ACS synthetic biology, 7(3), 807—813. {{DOI|10.1021/acssynbio.7b00446}} {{PMID|29486117}}
# Ting Wang, Yong Liu, Huan-Huan Sun, Bin-Cheng Yin, Bang-Ce Ye.(2019). An RNA-Guided Cas9 Nickase-Based Method for Universal Isothermal DNA Amplification. Angewandte Chemie International Edition,  {{DOI|10.1002/anie.201901292}}
# Smith, C. J., Castanon, O., Said, K., Volf, V., Khoshakhlagh, P., Hornick, A., ... & Myllykallio, H. (2019). [https://www.biorxiv.org/content/10.1101/574020v1 Enabling large-scale genome editing by reducing DNA nicking]. bioRxiv 574020  {{DOI|10.1101/574020 }}    <small>Метод позволяет одновременно редактировать более 10 000 локусов в клетках человека.</small>
# Hirosawa, M., Fujita, Y., & Saito, H. (2019). [https://doi.org/10.1021/acssynbio.9b00073  Cell-type-specific CRISPR activation with microRNA-responsive AcrllA4 switch]. ACS synthetic biology. 8(7), 1575-1582  {{PMID|31268303}}
# Wang, D., Zhang, F., & Gao, G. (2020). CRISPR-Based Therapeutic Genome Editing: Strategies and In Vivo Delivery by AAV Vectors. Cell, 181(1), 136-150.  {{PMID|32243786}} {{DOI|10.1016/j.cell.2020.03.023}}
# Alagoz, M., & Kherad, N. (2020). [https://www.spandidos-publications.com/10.3892/ijmm.2020.4609   Advance genome editing technologies in the treatment of human diseases]: CRISPR therapy. International Journal of Molecular Medicine.   https://doi.org/10.3892/ijmm.2020.4609
# STEVEN LEVY (2020). [https://www.wired.com/story/could-crispr-be-the-next-virus-killer/  Could Crispr Be Humanity's Next Virus Killer?]. WIRED
# Timothy R. Abbott, Girija Dhamdhere, Yanxia Liu et al., (2020). Development of CRISPR as an Antiviral Strategy to Combat SARS-CoV-2 and Influenza. Cell  https://doi.org/10.1016/j.cell.2020.04.020
# Xie H, Ge X, Yang F, Wang B, Li S, Duan J, et al. (2020). High-fidelity SaCas9 identified by directional screening in human cells. PLoS Biol 18(7): e3000747. https://doi.org/10.1371/journal.pbio.3000747
# Armando Casas-Mollano J., Zinselmeier M. H., Erickson S.E., and Smanski M.J. (2020). [https://doi.org/10.1089/crispr.2020.0064  CRISPR-Cas Activators for Engineering Gene Expression in Higher Eukaryotes]. CRISPR J.; 3(5): 350–364   {{doi|10.1089/crispr.2020.0064}} {{PMC|7580621}}
# Horodecka K, Düchler M. CRISPR/Cas9: Principle, Applications, and Delivery through Extracellular Vesicles. International Journal of Molecular Sciences. 2021; 22(11):6072. https://doi.org/10.3390/ijms22116072
# Denes CE, Cole AJ, Aksoy YA, Li G, Neely GG, Hesselson D. (2021). Approaches to Enhance Precise CRISPR/Cas9-Mediated Genome Editing. International Journal of Molecular Sciences.  22(16):8571. https://doi.org/10.3390/ijms22168571
# Pan, C., Wu, X., Markel, K. et al. (2021). CRISPR–Act3.0 for highly efficient multiplexed gene activation in plants. Nat. Plants  https://doi.org/10.1038/s41477-021-00953-7
# Park, J., Yoon, J., Kwon, D., Han, M. J., Choi, S., Park, S., ... & Choe, S. (2021). Enhanced genome editing efficiency of CRISPR PLUS: Cas9 chimeric fusion proteins. Scientific Reports, 11(1), 1-9.  {{PMID|34376729}} {{PMC|8355345}} {{DOI|10.1038/s41598-021-95406-8}}
# Corsi, G. I., Gadekar, V. P., Gorodkin, J., & Seemann, S. E. (2021). CRISPRroots: on-and off-target assessment of RNA-seq data in CRISPR–Cas9 edited cells.  Nucleic Acids Research, 50(4), e20 {{PMID|34850137}} {{DOI|10.1093/nar/gkab1131}}
# Nambiar, T. S., Baudrier, L., Billon, P., & Ciccia, A. (2022). CRISPR-based genome editing through the lens of DNA repair. Molecular Cell, 82(2), 348-388. {{PMID|35063100}} {{PMC|8887926}} (available on 2023-01-20) {{DOI|10.1016/j.molcel.2021.12.026}}
# Amendola, M., Brusson, M., & Miccio, A. CRISPRthripsis: The Risk of CRISPR/Cas9-induced Chromothripsis in Gene Therapy. Stem Cells Translational Medicine, 11(10), 1003–1009 {{PMID|36048170}} {{PMC|9585945}} {{DOI|10.1093/stcltm/szac064}}
# Carusillo, A., Haider, S., Schäfer, R., Rhiel, M., Türk, D., Chmielewski, K. O., ... & Mussolino, C. (2023). A novel Cas9 fusion protein promotes targeted genome editing with reduced mutational burden in primary human cells. Nucleic Acids Research, 51(9), 4660-4673. {{PMID|37070192}} {{PMC|10201422}} {{DOI|10.1093/nar/gkad255}}
# Passos, G. A. (2023). [https://link.springer.com/book/10.1007/978-3-031-33325-5 Genome Editing in Biomedical Sciences]. Springer Nature. 209 стр. https://doi.org/10.1007/978-3-031-33325-5  <small>Книга фокусируется на применении системы Crispr для редактирования генома клеток человека (in vitro и in vivo) и модельных организмов, используемых в биомедицинских исследованиях.</small>
# Tyumentseva, M., Tyumentsev, A., & Akimkin, V. (2023). CRISPR/Cas9 Landscape: Current State and Future Perspectives. International Journal of Molecular Sciences, 24(22), 16077. {{DOI|10.3390/ijms242216077}}
# Karpov, D. S. (2024). CRISPR-Cas Systems and Genome Editing: Beginning the Era of CRISPR/Cas Therapies for Humans. International Journal of Molecular Sciences, 25(10), 5292. {{doi|10.3390/ijms25105292}}

== Ссылки ==
{{Внешние ссылки}}

* {{публикация|книга|язык=en
|заглавие=1CRISPR/Cas9 Genome Editing
|подзаголовок=Application Guide
|издательство=OriGene
|allpages=53
|архив=https://web.archive.org/web/20150905192640/http://www.origene.com/assets/documents/CRISPR-CAS9/CRISPR_manual.pdf
|архив дата=2015-09-05
}}

{{Биоинженерия}}

[[Категория:Молекулярно-генетические процессы]]
[[Категория:Генетическая инженерия]]
[[Категория:Методы молекулярной биологии]]