Экстракция смесью фенол-хлороформ
Экстракцию смесью фенол–хлороформ используют в молекулярной биологии для выделения нуклеиновых кислот и удаления белков и липидов.[1]
Процесс[править | править код]
К водным образцам, лизатам клеток, гомогенатам тканей, добавляют равный объем смеси фенол:хлороформ. Смесь фенола и хлороформа не смешивается с водой, образец центрифугируют для лучшего разделения двух фаз. В результате менее плотная водная фаза находится сверху от органической (фенол:хлороформ). Белки и гидрофобные липиды остаются в нижней органической фазе, а нуклеиновые кислоты (а также соли, сахара и т. д.) в верхней водной фазе. Верхнюю водную фазу отбирают пипеткой, стараясь не внести органическую фазу или интерфазу. Эту процедуру часто выполняют несколько раз, чтобы увеличить чистоту ДНК.[2]
Если смесь имеет кислую среду, ДНК будет попадать в органическую фазу, а РНК оставаться в водной фазе.
См. также[править | править код]
- Экстракция гуанидин тиоцианатом - фенол - хлороформом
- Спиртовое осаждение
- Очистка нуклеиновых кислот спин-колонками
Список литературы[править | править код]
- ↑ Zumbo, P. Phenol-chloroform Extraction. Weill Cornell Medical College. Дата обращения: 25 марта 2018. Архивировано 24 октября 2018 года.
- ↑ Sambrook, Joseph; Russell, David W. Commonly Used Techniques in Molecular Cloning (неопр.) // Molecular Cloning. — 2001. — Т. 3. Архивировано 13 октября 2018 года.