Иммунопроба

Метод иммунологического анализа (иммунохимический анализ) — это биохимический тест, который измеряет наличие или концентрацию макромолекул или микромолекул в растворе с помощью антитела или антигена.

Молекула, обнаруженная в результате теста, называется аналитом и во многих случаях является белком. Однако оно может быть разного типа и размера, пока антитело сохраняет способность распознавать и связывать определенную молекулу.

Аналиты в биологических жидкостях, таких как сыворотка или моча, часто измеряются с помощью этого метода в медицинских или исследовательских целях.

Метод иммунологического анализа применяется в различных формах: он может быть выполнен в случае гетерогенных (или сепаративных) тестов с несколькими этапами путем добавления и промывки реагентов или их разделения в разные этапы, или, в случае однородных (несепаративных) тестов, путем смешивания образца с реагентами и проведения физического измерения.

Принцип

Иммуноанализ основывается на способности антитела распознавать и связывать конкретную макромолекулу, которая может представлять собой сложную смесь макромолекул. В иммунологии конкретная макромолекула, связанная антителом, называется антигеном, а область на антигене, с которой связывается антитело, называется эпитопом.

В некоторых случаях в иммуноанализе можно использовать антиген для обнаружения в растворе антител, распознающих этот антиген. Другими словами, в некоторых иммуноанализах аналит может быть антителом, а не антигеном.

Помимо связывания антитела с его антигеном, другой ключевой особенностью всех иммуноанализов является способ получения измеримого сигнала в ответ на связывание. Большинство, хотя и не все, иммуноанализы включают химическое связывание антител или антигенов с какой-либо детектируемой меткой. В современных иммуноанализах существует большое количество меток, и они позволяют обнаруживать их различными способами. Многие метки поддаются обнаружению, потому что они либо излучают излучение, либо вызывают изменение цвета раствора, флуоресцируют на свету, либо могут излучать свет.

Литература

• Berson S. A., Yalow R. S., Bauman A., Rothschild M. A. and Newerly K., Insulin-I131 metabolism in human subjects: demonstration of insulin binding globulin in the circulation of insulin treated subjects, Journal of Clinical Investigation, vol. 35, no. 2, 170—190 (1956)
• Yalow R. S. and Berson S. A., Immunoassay of endogenous plasma insulin in man, Journal of Clinical Investigation, vol. 39, no. 7,1157-1175 (1960)
• Yalow R. S. and Berson S. A., Immunoassay of plasma insulin in man, Diabetes, vol. 10, no. 5, 339—344 (1961)
• Wide L. and Porath J., Radioimmunoassay of proteins with the use of Sephadex-coupled antibodies, Biochimica et Biophysica Acta — General Subjects, vol. 130, no. 1, 257—260 (1966)
• Nakane P. K. and Pierce G. B. Jr., Enzyme-labeled antibodies for the light and electron microscopic localization of tissue antigens, Journal of Cell Biology, vol. 33, no. 2, 307—318 (1967)
• Avrameas S., Coupling of enzymes to proteins with glutaraldehyde. Use of the conjugates for the detection of antigens and antibodies, Immunochemistry, vol. 6, no. 1, 43-52 (1969)
• Engvall E. and Perlmann P., Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Quantitative assay of immunoglobulin G, Immunochemistry, vol. 8, no. 9, 871—874 (1971)
• van Weemen B. K. and Schuurs A. H. W. M., Immunoassay using antigen-enzyme conjugates, FEBS letters, vol. 15, no. 3, 232—236 (1971)
• van Weemen B. K. and Schuurs A. H. W. M., Immunoassay using hapten-enzyme conjugates, FEBS letters, vol. 24, no. 1, 77-81 (1972)
• Pittman J. A. Jr., RIA: An historical note, Clinical Chemistry, vol. 19, no. 7, 793 (1973)
• van Weemen B. K. and Schuurs A. H. W. M,, Immunoassay using antibody-enzyme conjugates, FEBS letters, vol. 43, no. 2, 215—218 (1974)
• Voller A., Bidwell D. E. and Engvall E., A microplate method of enzyme-linked immunosorbent assay and its application to malaria, Bulletin of the World Health Organization, vol. 51, no. 2, 209—211 (1974)
• Voller A., Bidwell D. E. and Bartlett A., Enzyme immunoassays in diagnostic medicine, Bulletin of the World Health Organization, vol. 53, no. 1, 55-65 (1976)
• Yalow R. S., Citation Classic, Current Contents, 14, 98 (1977)
• Yalow R. S., Radioimmunoassay: a probe for the fine structure of biologic systems, Science, vol. 200, no. 4347, 1236—1245 (1978)
• Engvall E., Citation Classic, Current Contents, 12, 16 (1987)
• Voller A. and Bidwell D. E., Better health care with microplate ELISA, Citation Classic, Current Contents, 17, 14 (1989)
• Mujumdar R. B., Ernst L. A., Mujumdar S. R. and Waggoner A. S., Cyanine dye labeling reagents containing isothiocyanate groups, Cytometry, vol. 10, no. 1, 11-19 (1989)
• Yalow R. S., Remembrance project: origins of RIA, Endocrinology, vol. 129, no. 4, 1694—1695 (1991)
• Engvall E., Perspective on the historical note on EIA/ELISA by Dr. R. M. Lequin, Clinical Chemistry, vol. 51, no. 12, 2225 (2005)
• van Weemen B. K., The rise of EIA/ELISA, Clinical Chemistry, vol. 51, no. 12, 2226 (2005)
• Lequin R. M., Enzyme Immunoassay (EIA)/Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA), Clinical Chemistry, vol. 51, no. 12, 2415—2418 (2005)
• Avrameas S., Historical background of the invention of EIA and ELISA, Clinical Chemistry, vol. 52, no. 7, 1430—1431 (2006)
• Hammarström S., Berzins K., Biberfeld P., Engvall E., Hammarström M.-L., Holm G., Troye-Blomberg M. and Wahlgren M., Peter Perlmann 1919—2005, Scandinavian Journal of Immunology, vol. 63, no. 6, 487—489 (2006)