Реактив Эллмана: различия между версиями
| [отпатрулированная версия] | [отпатрулированная версия] |
Эрг (обсуждение | вклад) Нет описания правки |
Эрг (обсуждение | вклад) |
||
| Строка 117: | Строка 117: | ||
== Тест Эллмана == |
== Тест Эллмана == |
||
При реакции сульфгидрильных (тиоловых) групп с реактивом Эллмана происходит разрыв дисульфидной связи в реактиве и образуется 2-нитро-5-тиобензойная кислота, которая легко переходит в хиноидную форму в воде при нейтральных и щелочных рH. |
|||
: [[Файл:DTNB reaction with thiol.svg||left|600px|Reaction of DTNB with a thiol (R-SH).]]{{clear|left}} |
|||
Реакция протекает быстро и со стехиометрией один к одному. Образовавшийся продукт в хиноидной форме обладает сильным поглощением при 412 нм и может количественно определятся при помощи [[спектрофотометр]]а. Для разбавленных буферных растворов используется [[молярный коэффициент экстинкции]] 14,150 [[Концентрация растворов#Молярность (молярная объёмная концентрация)|M<sup>−1</sup>]] см<sup>−1</sup><ref>{{cite journal |author=Collier HB |title=Letter: A note on the molar absorptivity of reduced Ellman's reagent, 3-carboxylato-4-nitrothiophenolate |journal=Anal. Biochem. |volume=56 |issue=1 |pages=310–1 |year=1973 |pmid=4764694 |doi=10.1016/0003-2697(73)90196-6}}</ref><ref name=Riddles>{{cite journal |author=Riddles PW, Blakeley RL, Zerner B |title=Reassessment of Ellman's reagent |journal=Meth. Enzymol. |volume=91 |issue= |pages=49–60 |year=1983 |pmid=6855597 |doi=10.1016/S0076-6879(83)91010-8 |series=Methods in Enzymology |isbn=978-0-12-181991-0}}</ref>, а для растворов с высокой концентрацией солей, например в растворе 6-ти молярного [[гуанидин]] хлорида или [[Мочевина|мочевины]] — 13,700 M<sup>−1</sup> см<sup>−1</sup><ref name=Riddles/>. К несчастью, в оригинальной работе 1959 года коэффициент экстинкции для разбавленных растворов был занижен до 13,600 M<sup>−1</sup> см<sup>−1</sup>, и эта ошибка со временем закрепилась в литературе<ref name=Riener>{{cite journal |author=Riener CK, Kada G, Gruber HJ |title=Quick measurement of protein sulfhydryls with Ellman's reagent and with 4,4'-dithiodipyridine |journal=Anal Bioanal Chem |volume=373 |issue=4–5 |pages=266–76 |year=2002 |pmid=12110978 |doi=10.1007/s00216-002-1347-2}}</ref>. Следует отметить, что коммерческий ДНТБ не всегда полностью чист, по этому для получения точных и воспроизводимых результатов его следует [[перекристаллизация|перекристаллизовать]]<ref name=Riddles/>. |
|||
== Примечания == |
== Примечания == |
||
Версия от 21:30, 25 декабря 2015
| Реактив Эллмана | |
|---|---|
 | |
| Общие | |
| Систематическое наименование |
5-(3-карбокси-4-нитрофенил)дисульфанил-2-нитробензойная кислота |
| Сокращения | ДТНБ; DTNB |
| Традиционные названия | Дитионитробензойная кислота; 5,5'-Дитиобис(2-нитробензойная кислота) |
| Хим. формула | C14H8N2O8S2 |
| Физические свойства | |
| Молярная масса | 396,34 г/моль |
| Термические свойства | |
| Температура | |
| • кипения | 240 - 245 °C |
| Классификация | |
| Рег. номер CAS | 69-78-3 |
| PubChem | 6254 |
| Рег. номер EINECS | 200-714-4 |
| SMILES | |
| InChI | |
| ChEBI | 86228 |
| ChemSpider | 6018 |
| Безопасность | |
| Фразы риска (R) | R36, R37, R38 |
| Фразы безопасности (S) | S26, S36 |
| Краткие характер. опасности (H) |
H315, H319, H335 |
| Меры предостор. (P) |
P261, P305, P338, P351 |
| Приведены данные для стандартных условий (25 °C, 100 кПа), если не указано иное. | |
 Медиафайлы на Викискладе | |
Реактив Эллмана или 5,5'-дитиобис-(2-нитробензойная кислота) (ДТНБ) — химическое соединение используемое для количественного анализа тиоловых групп в образце[1]. Широко используется в биохимии для определения содержания цистеинов в белках и пептидах. Метод был разработан Джорджем Л. Эллманом в 1959 году.
Приготовление
В оригинальной статье Эллмана[1] описывается, что он приготовил этот реактив, окислив 2-нитро-5-хлорбензальдегид до карбоновой кислоты, ввёл тиоловую группу через сульфид натрия, а затем соединил два мономера, окисли в их йодом. В наше время этот реактив можно приобрести в готовом виде.
Тест Эллмана
При реакции сульфгидрильных (тиоловых) групп с реактивом Эллмана происходит разрыв дисульфидной связи в реактиве и образуется 2-нитро-5-тиобензойная кислота, которая легко переходит в хиноидную форму в воде при нейтральных и щелочных рH.
Reaction of DTNB with a thiol (R-SH).
Реакция протекает быстро и со стехиометрией один к одному. Образовавшийся продукт в хиноидной форме обладает сильным поглощением при 412 нм и может количественно определятся при помощи спектрофотометра. Для разбавленных буферных растворов используется молярный коэффициент экстинкции 14,150 M−1 см−1[2][3], а для растворов с высокой концентрацией солей, например в растворе 6-ти молярного гуанидин хлорида или мочевины — 13,700 M−1 см−1[3]. К несчастью, в оригинальной работе 1959 года коэффициент экстинкции для разбавленных растворов был занижен до 13,600 M−1 см−1, и эта ошибка со временем закрепилась в литературе[4]. Следует отметить, что коммерческий ДНТБ не всегда полностью чист, по этому для получения точных и воспроизводимых результатов его следует перекристаллизовать[3].
Примечания
- ↑ 1 2 Ellman GL (1959). "Tissue sulfhydryl groups". Arch. Biochem. Biophys. 82 (1): 70—7. doi:10.1016/0003-9861(59)90090-6. PMID 13650640.
- ↑ Collier HB (1973). "Letter: A note on the molar absorptivity of reduced Ellman's reagent, 3-carboxylato-4-nitrothiophenolate". Anal. Biochem. 56 (1): 310—1. doi:10.1016/0003-2697(73)90196-6. PMID 4764694.
- ↑ 1 2 3 Riddles PW, Blakeley RL, Zerner B (1983). "Reassessment of Ellman's reagent". Meth. Enzymol. Methods in Enzymology. 91: 49—60. doi:10.1016/S0076-6879(83)91010-8. ISBN 978-0-12-181991-0. PMID 6855597.
{{cite journal}}: Википедия:Обслуживание CS1 (множественные имена: authors list) (ссылка) - ↑ Riener CK, Kada G, Gruber HJ (2002). "Quick measurement of protein sulfhydryls with Ellman's reagent and with 4,4'-dithiodipyridine". Anal Bioanal Chem. 373 (4—5): 266—76. doi:10.1007/s00216-002-1347-2. PMID 12110978.
{{cite journal}}: Википедия:Обслуживание CS1 (множественные имена: authors list) (ссылка)
Внешние ссылки
- Quantitation of sulfhydryls DTNB, Ellman’s reagent (uses incorrect absorbance coefficient)