Иммунофлуоресцентный анализ

Материал из Википедии — свободной энциклопедии
Перейти к: навигация, поиск

Метод флуоресцирующих антител (МФА, иммунофлуоресценция) (англ. Immunofluorescence) — лабораторный иммунологический метод качественного определения антигена по известному глобулину или антител по известному антигену.

Сущность и классификация МФА[править | править исходный текст]

Сущность метода флюоресцирующих антител заключается в визуализации реакции антиген-антитело люминесцентными маркерами. Метод конъюгации глобулинов с органическими флюорохромами разработан в 1942 году А. Кунсом (англ.)русск..[1]

Различают МФА прямой, разработанный А. Кунсом и Мелвином Капланом,[2] МФА непрямой, разработанный А. Кунсом и Уиллером и непрямой МФА с комплементом.

При прямом методе (пМФА) на препарат с антигеном наносят известную, предположительно соответствующую ему, люминесцирующую сыворотку. В случае образования комплекса, он обнаруживается, люминесцентной микроскопией в виде зеленоватого свечения разной степени интенсивности и четкости.

При непрямом методе (нМФА) на мазок из наслоения антигена и немеченой сыворотки наносят антиглобулиновую (видовую по отношению к диагностической сыворотке) люминесцирующую сыворотку. В случае образования комплекса антиген-антитело, последний компонент реагирует с видовой антиглобулиновой люминесцирующей сывороткой. При нМФА с комплементом, его добавляют к комплексу антиген-антитело и идентифицируют образование тройного комплекса по люминесцирующей антикомплементарной сыворотке.

Результаты описываются в так называемых «крестах» (от одного + до четырех ++++) — субъективная градация исследователем степени выраженности реакции. Непрямые методы требуют наличия только антиглобулиновых видовых сывороток с флюорохромами, но при этом необходимо большое количество тестовых контролей. При постановке прямым методом делается только один контроль, но требуется множество моноспецифических сывороток. Недостатками всех видов МФА является ограниченная чувствительность из-за наличия возможных перекрестных реакций между близкими по антигенному составу объектами и неспецифическая флуоресценция вследствие адсорбции флуоресцирующих глобулинов на различных элементах препарата. В настоящее время используются коммерческие стандартные конъюгаты, содержащие глобулины к исследуемым антигенам. Метод флуоресцирующих антител [1]

Примечания[править | править исходный текст]