shRNA

Материал из Википедии — свободной энциклопедии
Перейти к: навигация, поиск

Малые РНК, образующие шпильки, или короткие РНК, образующие шпильки (англ. shRNA, small hairpin RNA, short hairpin RNA) — короткие молекулы рибонуклеиновых кислот, образующие во вторичной структуре плотные шпильки (структуры типа «стебель-петля»). ShRNA могут быть использованы для подавления экспрессии генов путём РНК-интерференции. Короткие РНК, образующие шпильки, вводят в клетки при помощи векторов, в которых кодирующие их последовательности находятся под контролем конститутивно активных (таких как U6) или индуцируемых промоторов. Такие векторы, как правило, содержат последовательности нуклеотидов, которые позволяют им интегрироваться в геном клетки и тем самым обеспечивать наследуемое подавление экспрессии целевого гена[1].

Малые РНК, образующие шпильки, транскрибируются РНК-полимеразой III. Образование shRNA в клетках млекопитающих иногда вызывает интерфероновый ответ, для защиты клетки, как в случае вирусной атаки. Такие процессы не наблюдаются в случае miRNA (микроРНК), которые транскрибируются РНК-полимеразой II[2].

После завершения транскрипции малые РНК, образующие шпильки, разрезаются клеточными ферментами с образованием малых интерферирующих РНК (англ. siRNA). Малые интерферирующие РНК входят в состав РНК-индуцируемого комплекса выключения гена (RISC). Этот комплекс связывается с мРНК, участки которых комплементарны siRNA, и разрезает их.

Малые РНК, образующие шпильки, также используются и у растений. В таком случае традиционно используют конститувно активный промотор CaMV35S из вируса мозаики цветной капусты (англ. cauliflower mosaic virus 35S promoter)[3].

Примечания[править | править исходный текст]

  1. Paddison P, Caudy A, Bernstein E, Hannon G, Conklin D (2002). «Short hairpin RNAs (shRNAs) induce sequence-specific silencing in mammalian cells». Genes Dev. 16 (8): 948–58. DOI:10.1101/gad.981002. PMID 11959843.
  2. Cao W, Hunter R, Strnatka D, McQueen C, Erickson R (2005). «DNA constructs designed to produce short hairpin, interfering RNAs in transgenic mice sometimes show early lethality and an interferon response». J. Appl. Genet. 46 (2): 217–25. PMID 15876690.
  3. McIntyre G, Fanning G (2006). «Design and cloning strategies for constructing shRNA expression vectors». BMC Biotechnol. 6: 1. DOI:10.1186/1472-6750-6-1. PMID 16396676.